生化試劑盒應(yīng)用領(lǐng)域廣泛，涉及酶類、氧化應(yīng)激、鐵死亡、肝功能、腎功能、氨基酸蛋白、糖酵解、無機(jī)鹽離子、脂質(zhì)代謝、植物抗逆性等。檢測樣本類型豐富，涉及多種體液、組織、細(xì)胞、食品、植物、藥物、化妝品等。主要的檢測儀器為酶標(biāo)儀，分光光度計(jì)和熒光酶標(biāo)儀。

 

　　生化試劑盒的反應(yīng)原理：

 

　　對于延遲區(qū)來講，無規(guī)律可尋，對于指標(biāo)檢測沒有意義。

 

　　等速區(qū)對應(yīng)的指標(biāo)檢測方法是速率法。速率法又稱連續(xù)監(jiān)測法，是在測定酶活性或用酶法測定代謝產(chǎn)物時，連續(xù)選取時間-吸光度曲線中線性期內(nèi)4個以上測光點(diǎn)作為讀數(shù)點(diǎn)，并以單位時間吸光度變化值計(jì)算結(jié)果。線性期就是此期間內(nèi)各測光點(diǎn)之間的吸光度差值相等，此線性期對酶促反應(yīng)的底物來說屬于零級反應(yīng)。其測光點(diǎn)一般設(shè)置在加入啟動因子并孵育一段時間后開始，持續(xù)1-3min，一般應(yīng)用于酶類項(xiàng)目，可以使用因數(shù)法來計(jì)算待測濃度。

 

　　過渡區(qū)對應(yīng)是固定時間法，是終點(diǎn)法中存在一種特殊情況，指在時間-吸光度曲線上選擇兩個讀數(shù)點(diǎn)，此兩點(diǎn)既非反應(yīng)初始吸光度亦非平衡點(diǎn)吸光度，這兩點(diǎn)的吸光度差值用于結(jié)果計(jì)算。目的是解決某些化學(xué)反應(yīng)的非特異性問題，提高準(zhǔn)確度。

 

　　平衡區(qū)對應(yīng)的是終點(diǎn)法，按測光點(diǎn)的個數(shù)分為：一點(diǎn)終點(diǎn)法、兩點(diǎn)終點(diǎn)法。

 

　　一點(diǎn)終點(diǎn)法是指在反應(yīng)到達(dá)平衡點(diǎn)，即在時間-吸光度曲線上吸光度不再改變時，選擇一個測光點(diǎn)計(jì)算待測物質(zhì)濃度。

 

　　兩點(diǎn)終點(diǎn)法常應(yīng)用于雙試劑的測定項(xiàng)目中，多數(shù)一試劑通常只含緩沖液等成分，它與樣本一般不起特異性反應(yīng);因此在二試劑加入前，選擇一個測光點(diǎn)作為第一讀數(shù)點(diǎn)，此時的吸光度相當(dāng)于樣品空白。加入二試劑后待測物質(zhì)起反應(yīng)，并經(jīng)過一定時間反應(yīng)到達(dá)平衡點(diǎn)，此時選擇二個讀數(shù)點(diǎn)，兩讀數(shù)點(diǎn)吸光度之差用于計(jì)算待測物質(zhì)濃度。

 

　　兩點(diǎn)法能有效消除樣品溶血、黃疸、脂濁等造成的光吸收干擾。如：酶法測定葡萄糖、總膽固醇、甘油三酯、尿酸、肌酐，以及化學(xué)法測定總蛋白、總膽紅素、直接膽紅素、鈣、磷、鎂、鐵等;并且都能在加入第二試劑后的2-5 min內(nèi)達(dá)到反應(yīng)終點(diǎn)。